激光顯微細胞分離技術

激光顯微細胞分離技術
美國國立健康研究院腫瘤研究所病理研究室與生物醫(yī)學設備組合作研發(fā)激光俘獲顯微切割技術，發(fā)展為Acturus 的PixCell II系統。在操作這套系統時，首先在組織切片上覆蓋一層透明的膜，在顯微鏡下觀察該組織切片，選擇某一特殊細胞后，開啟脈沖式紅外激光束，使膜融化變得粘性很強(該膜的成份為 Ethylene Vinyl Acetate Polymer)，等到冷卻后將該位置的細胞牢固地粘附在上面從而分離細胞。
該種方法較以往方法改進之處：首先，它簡單，不需要移動任何切片部位，一步即可完成從組織中分離特殊細胞，這些在膜上的細胞依然保持其原有的形態(tài)，使用無菌、一次性的膜可zui大限度地避免可能的污染。這對于后續(xù)進行PCR檢測是尤為重要的。其次，使膜活化所需的激光能量很小(<50mW)，與常規(guī)顯微配合是充足的，完夠滿足臨床病理組織細胞顯微分離的需要。再者，LCM技術分離細胞速度較以往方法有很大提高，例如，從腎組織切片中分離一激光顯微細胞分離技術 個腎小球(Glomerulus)所需時間小于10秒，一小時內即可輕松地分離上百個腎小球。
神經系統主要由兩類細胞組成：神經元和膠質細胞。在腦內，不同解剖區(qū)域行使不同功能，這里所講的解剖區(qū)域是指核團。核團在顯微鏡下才可以辨別，是相對集中在一個區(qū)域的可能行使一定功能的神經元和膠質細胞的集合體。把某個核團從腦內取出來是不太現實的。腦內核團數以百計，如果要想研究基因在腦內核團的表達水平，在以前只能用原位雜交技術。
如果要想研究蛋白質的表達水平或磷酸化等狀態(tài)，只能用免疫組織化學技術。而這兩個技術雖然能定位基因或蛋白質在腦內核團的表達情況,缺點是通量小。
因此，如果研究者主要是為了研究很多種基因在特定核團的神經元或膠質細胞的表達情況，新的解決方案之一就是組合LCM技術、RNA擴增技術和基因芯片技術。即利用LCM技術將特定核團的神經元或膠質細胞取出，提取總RNA或mRNA，RNA反轉錄為cDNA并進行擴增.zui后將cDNA標記為探針，和基因芯片雜交。如果研究的基因種類數不多，那么也可以只提取LCM獲得的細胞的總RNA，利用定量RT-PCR技術來進行基因表達分析。

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