ELISA試劑盒相應的抗體結合

　　酶免疫測定(enzymeimmunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進行游離的和結合的標記物的分離而直接測定標記物。ELISA試劑盒例如在某種條件下，抗原抗體反應后形成的酶標記抗原抗體復合物中的酶失去其對底物作用的活力，因而測出的酶活力直接反映游離的酶標記物。

    均相EIA在臨床檢驗中較少應用。非均相EIA需先進行游離的和結合的標記物的分離。如前所述，固相載體可用作一種分離手段。這種固相酶免疫測定方法在1971年zui初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinked immunosorbent assay)，簡稱ELISA，在國內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫吸附試驗的，雖然含義不*確切，但已習用。如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml，但在臨床檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。

    標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中，標記物分別為放射性核素和酶，zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。但是這種特異性也不是的。假使兩種化合物有著部分相同的結構，ELISA試劑盒在抗原抗體反應中可出現(xiàn)交叉反應。例如：絨毛膜促性腺激素(hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成，其結構的不同處在β亞單位，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體，抗α-hCG抗體將與LH中的
α酶位發(fā)生交叉反應。在臨床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG，只能用于hCG濃度較高的試驗，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應。因此在作為早孕診斷(敏感度應達到50mIu/mlhCG)的實際中必須應用只對hCG特異的抗β-hCG，以避免與其它激素的交叉反應的發(fā)生。
1.3.4 敏感性
在測定血清中某一物質(zhì)的含量時，化學比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應測定法的敏感度約為5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平。例如，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg，其敏感度可達0.1ng /ml。
1.4 免疫測定在臨床檢驗中的應用
由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原，ELISA試劑盒因此免疫測定的應用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：
1) 體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。